本发明提供一种用于检测马拉硫磷的3D纸基微流控装置，包括纸层ⅰ（a）、纸层ⅱ（b）和纸层ⅲ（c），纸层ⅱ（b）位于纸层ⅰ（a）和纸层ⅲ（c）之间，并能够折叠而固定纸层ⅰ（a）和纸层ⅲ（c），纸层ⅰ（a）和纸层ⅲ（c）上用油性马克笔绘制疏水通道，形成亲水区，在纸层ⅱ（b）留有亲水区，其中，纸层ⅰ（a）是加样层，亲水区预加载了ALP，纸层ⅱ（b）是酶水解层，亲水区固定有AA2P，纸层ⅲ（c）是化学发光层，亲水区固定着Pt‑Co‑N‑C纳米酶。本发明还提供一种使用上述装置检测马拉硫磷的方法。本发明无需任何仪器，操作简单、轻巧便携；与其他快速检测方法相比，具有更高的灵敏度。