本发明公开了一种膀胱癌快速检测试剂盒。包括检测HIST1H4F基因和SOX1‑OT基因的引物和探针，核苷酸序列如SEQ ID NO：1～4、7和8所示。本发明的引物和探针扩增效率高，特异性强，稳定性好。甲基化敏感限制性内切酶为RruI、HpaII和TaiI混合而成的酶混合液，有效提高酶切效率，减少酶切不完全的发生，减少假阳性结果的发生，保证检测结果的准确性。酶切扩增缓冲液加入了BSA和甘油，保护基化敏感型限制性内切酶和Taq DNA聚合酶活性，提高酶切效率。缩短了检测时间，酶切和荧光PCR可以在同一个PCR管中进行，不需要额外提纯，操作步骤进一步简化；DNA损失少，检测灵敏度更高。