本发明公开了一种针对鸡沙门氏菌的分子检测试剂盒及其非诊断性检测方法。所述试剂盒包括多重PCR检测引物组、阳性对照和阴性对照，所述阳性对照包括鼠伤寒沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌基因组DNA；所述阴性对照为灭菌双蒸水；所述多重PCR检测引物组包括：沙门氏菌属检测引物序列SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、鸡伤寒血清型检测引物序列SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、鸡伤寒生物型检测引物序列SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6。本发明的试剂盒和检测方法具有快速、简单、特异性强、灵敏度高的优点，相比传统的沙门氏菌生化鉴定结合血清学分型方法，在检测时间与检测成本方面具有较大优势，适用于临床批量检测。