本发明公开了一种孕甾烷糖苷Paniculatoside C的制备方法，其孕甾烷糖苷Paniculatoside C的制备方法包括如下步骤：将粉碎后的七层楼用乙醇进行浸泡提取若干次得到醇提取物后，加水混悬，依次采用石油醚、乙酸乙酯、以及正丁醇萃取数次，分别得到石油醚层浸膏、乙酸乙酯层浸膏和正丁醇层浸膏，合并石油醚层浸膏和乙酸乙酯层浸膏后加入水混悬，采用酸碱萃取方法，得到A①部分浸膏；用正相硅胶柱梯度洗脱的方法进行粗分段，得到各个分段之后再综合使用凝胶柱色谱法、正相硅柱色谱法、反相硅胶柱色谱法、制备薄层色谱法进行纯化提取即得Paniculatoside C，该方法收率较高。