本发明属于生物制药技术领域，具体公开了一种PVRIG亲和肽、多肽探针及其应用。本发明以PVRIG为靶分子，通过噬菌体展示十二肽库技术筛选得到PVRIG亲和肽，并对其进行优化改造，得到多条高亲和PVRIG的截短肽、丙氨酸扫描肽、D构型保护肽等衍生肽或修饰肽。亲和阻断活性实验证实，PVRIG亲和肽特异性靶向PVRIG的胞外IgV样结构域，阻断PVRIG/CD112的结合。体外亲和力实验和小鼠体内抗肿瘤实验验证，上述高阻断率肽能够显著抑制小鼠MC38结肠癌和4T1小鼠乳腺癌的生长，且无明显毒副作用，在肿瘤诊断或示踪成像、防治肿瘤或自身免疫性疾病等方面具有良好的应用前景。