本发明公开了一种高灵敏度检测α‑鹅膏毒肽的电化学适配体传感器及其制备方法和应用，属于电化学检测技术领域。该传感器工作电极为玻碳电极，先采用金纳米晶体修饰电极，然后将适配体以金‑硫键连接在金纳米晶体上，再用巯基己醇将剩余的活性位点封闭。该电化学适配体传感器对α‑鹅膏毒肽的选择性强，灵敏度高，样品前处理步骤简单，方法快速简便，实际人体样品检测结果令人满意。本发明制备的电化学适配体传感器已成功应用于人体尿液中的α‑鹅膏毒肽的检测，具有极低的检出限，宽的检测范围，优秀的选择性和稳定性。