本发明涉及生物活性肽相关技术领域，公开了一种具有促进睾酮合成活性的九肽及其应用，所述九肽的一级结构氨基酸序列为Gly‑Pro‑Tyr‑Gly‑Pro‑Ala‑Gly‑Pro‑Arg，分子量为809.422Da。本发明的九肽既可以化学合成，也可以从东海乌参蛋白酶解产物或其他海参和水产动物蛋白酶解物中定向制备。本发明的九肽具有促进睾酮合成活性，主要体现在能够显著提高TM3睾丸间质细胞合成睾酮，增加细胞Lhcgr，Cacna1g，Plcg，Prkaca，StAR的基因表达，可直接用于预防和改善睾酮分泌不足现象的食品或药物中。