本发明提供一种复苏洗涤剂在复苏冻存细胞过程中的应用、制备及使用方法。复苏洗涤剂的制备原料包括纳米脂质体、蛋白质和PBS缓冲液。纳米脂质体与生物膜的成分及结构类似，可与生物膜融合。纳米级脂质体经过一定浓度的蛋白质孵化，形成蛋白冠结构，该蛋白冠结构可以将脂质体跨越细胞膜的方式调节为由膜融合机制转变为内吞机制。冻存细胞复苏过程中，通过调整复苏洗涤剂中蛋白质的浓度，使部分脂质体进入细胞内，与细胞器生物膜融合，修补细胞冻存时细胞内产生的小冰晶对细胞膜、细胞器的机械损伤，达到修复细胞的目的。该复苏洗涤剂能大大提高复苏后细胞的活率与活性，提高增殖速度、降低细胞的凋亡率，对细胞安全无毒，操作简单，容易应用。