本发明涉及一种用于结核分枝杆菌检测的裸眼可视化方法。构建基于靶标核酸识别形成含toehold的三向结(TWJ)并诱导多循环指数扩增，级联CRISPR/Cas14a磁分离增强金纳米比色的核酸检测生物传感器。涉及CRISPR‑Cas14a反式切割生物素化寡核苷酸链(biotin‑S1)，及磁珠复合物MB‑S1，用于捕获寡核苷酸链S2修饰的金纳米(AuNP‑S2)实现其磁下拉；特征过程涉及靶核酸诱导TWJ形成及等温指数扩增，其产物经脚趾介导链置换回收靶标实现多循环指数扩增；产物ssDNA激活CRISPR/Cas14a反式切割biotin‑S1，释放金纳米探针，磁分离后上清用于裸眼可视化检测；涉及针对特定靶结核分枝杆菌16S rDNA的特定三向结引物和模板，及含toehold的三向结介导多循环指数扩增和CRISPR/Cas14辅助磁分离增强AuNP比色用于结核分枝杆菌核酸的肉眼可视化检测的配方。