本发明提供一种二次酶解与碱解的蛋膜多肽的制备方法，包括制备蛋膜粉；将蛋膜粉碾揉处理，加入0.05‑0.1％NaOH和水混合，在6‑8℃下0.02‑0.03kw/声能密度的超声波处理；一次酶解，得一次酶解液和酶解蛋膜1；二次酶解，得二次酶解液和酶解蛋膜2；合并酶解液，得到食品级蛋膜多肽粉；合并二次酶解蛋膜，加水和0.4‑0.5％氢氧化钠进行碱水解反应；得到化妆品级蛋膜多肽粉，本发明通过对蛋膜粉水解前的预处理，并将二次酶解与低碱解有机耦合，实现了食品级和化妆品级蛋膜多肽粉的同步制备，提高蛋膜利用率，蛋膜多肽的产率高且其小分子活性肽含量占比提升，更利于人体吸收，生物利用率高。