本发明属于免疫细胞以及免疫治疗技术领域，具体涉及一种外周血抗原特异性CX3CR1+T细胞亚群的应用及其培养方法。本发明通过对肺癌患者中配对的外周血及肿瘤组织标本进行单细胞转录组及TCR测序，发现CX3CR1+T细胞与TIL TCR相似性较高且具有抗肿瘤效应性特征；进一步本发明收集临床肺癌患者样本，对其外周血中CX3CR1表达水平及功能进行全方面试验探究，首次证实CX3CR1+T细胞亚群具有抗肿瘤效应，属于外周血中存在的具有抗原特异性且功能较强的免疫细胞，说明CX3CR1+T细胞是外周血中具有肿瘤杀伤能力的新型细胞亚群，因此本发明能够为实体肿瘤的免疫细胞治疗提供新的策略。