一种过表达SLC43A2的嵌合抗原受体T细胞的制备方法和应用

    公开(公告)号:CN114990069B

    公开(公告)日:2023-09-22

    申请号:CN202210532292.8

    申请日:2022-05-17

    Abstract: 本发明公开了一种过表达SLC43A2的嵌合抗原受体T细胞的制备方法和应用,该过表达SLC43A2的嵌合抗原受体T细胞慢病毒表达质粒的制备步骤如下:(1)按照中心法则,获得所述CAR的编码序列DNA;(2)以PCDH质粒为表达载体,对其进行EcoRI/Sall双酶切,然后利用T4 DNA连接酶将步骤(1)中的编码序列DNA整合重组进入PCDH质粒中;(3)将步骤(2)中的连接产物转化STABL3感受态细胞,筛选、扩大培养后进一步提取质粒,即可获得重组后的慢病毒表达质粒,它通过制备成CAR‑T细胞进行应用。本发明不仅可以杀伤CD19阳性的肿瘤细胞,还增加了CART19细胞摄取甲硫氨酸的能力,增强了其扩增能力以及杀伤功能,增加了对肿瘤细胞的清除能力。

    一种过表达SLC43A2的嵌合抗原受体T细胞的制备方法和应用

    公开(公告)号:CN114990069A

    公开(公告)日:2022-09-02

    申请号:CN202210532292.8

    申请日:2022-05-17

    Abstract: 本发明公开了一种过表达SLC43A2的嵌合抗原受体T细胞的制备方法和应用,该过表达SLC43A2的嵌合抗原受体T细胞慢病毒表达质粒的制备步骤如下:(1)按照中心法则,获得所述CAR的编码序列DNA;(2)以PCDH质粒为表达载体,对其进行EcoRI/Sall双酶切,然后利用T4 DNA连接酶将步骤(1)中的编码序列DNA整合重组进入PCDH质粒中;(3)将步骤(2)中的连接产物转化STABL3感受态细胞,筛选、扩大培养后进一步提取质粒,即可获得重组后的慢病毒表达质粒,它通过制备成CAR‑T细胞进行应用。本发明不仅可以杀伤CD19阳性的肿瘤细胞,还增加了CART19细胞摄取甲硫氨酸的能力,增强了其扩增能力以及杀伤功能,增加了对肿瘤细胞的清除能力。

    一种单克隆细胞培养方法

    公开(公告)号:CN108130314B

    公开(公告)日:2022-05-17

    申请号:CN201810067517.0

    申请日:2018-01-24

    Abstract: 本申请属于单克隆细胞培养技术领域,具体涉及一种利用基因编辑技术构建稳定表达细胞系过程中的单克隆细胞培养方法专利申请事宜。该方法以CRISPR/Cas9基因编辑技术为基础,具体包括:利用CRISPR/Cas9技术对基因组进行编辑,利用3D软纤维蛋白基质胶对筛选所得细胞进行培养等步骤。总体而言,本发明将优化后的3D软纤维蛋白基质胶培养条件用于构建单克隆细胞群,大大提高了单细胞的存活率,从而快速筛选出基因修饰一致的,遗传背景完全一样的稳定转染细胞系。特别对于那些普通培养方法难以生长的细胞,具有明显的优势,从而有利于后续实验的进行。

    一种人Tscm细胞及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN108148805B

    公开(公告)日:2021-07-02

    申请号:CN201611102210.7

    申请日:2016-12-05

    Inventor: 张毅 张震 张超奇

    Abstract: 本发明属于生物免疫学领域,具体涉及一种人Tscm细胞及其制备方法和用途,所述制备方法包括以下步骤:(1)采集人脐带血,采用密度梯度离心法获得人脐带血单个核细胞;(2)采用流式细胞分选仪分选CD8+CD45RA+CCR7+初始T细胞亚群;(3)将分选的初始T细胞亚群加入含有刺激剂CD3/CD28 beads、细胞因子IL‑2和二甲双胍(metformin)的培养基中培养;(4)每隔2d进行换液并补加细胞因子IL‑2,扩增至14d时即可获得具有Tscm表型的CD8+T细胞。本发明的方法可以获得大量具有记忆特性同时分化状态低的T细胞用于肿瘤的治疗。

    一种代谢检查点FBP1激动剂及在抗肿瘤方面的应用

    公开(公告)号:CN110742901A

    公开(公告)日:2020-02-04

    申请号:CN201911188761.3

    申请日:2019-11-28

    Abstract: 本发明公开了一种代谢检查点FBP1激动剂及在抗肿瘤方面的应用。FBP1是葡萄糖异生的关键酶之一,其通过催化1,6-二磷酸果糖水解在糖降解过程中发挥抑制作用。已知FBP1在多种肿瘤细胞中低表达,与肿瘤细胞的生长增殖相关,激活FBP1可以抑制肿瘤细胞的生长增殖。本发明提供了一种代谢检查点FBP1激活剂,该激动剂为一种天然植物多糖,CCK-8试验证明其可以显著抑制人肺腺癌、肝癌和乳腺癌细胞增殖,且呈现明显的剂量依赖性;Western blotting试验证明该天然植物多糖可以有效激活上述肿瘤细胞中FBP1蛋白表达,这可能是其发挥抗人肺腺癌、肝癌和乳腺癌的作用机制。

    一种体外IAK免疫细胞培养方法

    公开(公告)号:CN106479973B

    公开(公告)日:2019-10-01

    申请号:CN201610914086.8

    申请日:2016-10-20

    Inventor: 杨黎 张毅

    Abstract: 本发明属于肿瘤预防和治疗技术领域,具体涉及一种优化的体外IAK免疫细胞培养方法。该方法包括:提取外周血单个核细胞,然后随培养时间不同分步骤、分批次加入特殊设计的A、B、C、D试剂,并培养至特定时间等步骤。本发明通过对IAK免疫细胞体外培养体系进行优化,使得该技术在细胞扩增能力、效应细胞表型及比例、杀伤能力等指标方面保持一致或有了较好改进,尤其是效应细胞比例、效应细胞的杀伤能力有了明显改善,从而使得该技术能够更好的用于肿瘤治疗,因而具有较好的实用价值和推广应用意义。

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