本发明涉及核酸检测领域，特别涉及一种基于Cas免扩增核酸检测方法及其应用。所述scDNA是通过采用不完全互补配对的iDNA与靶ssDNA退火杂交形成的具有ssDNA凸起的双链结构，所述scDNA上的ssDNA凸起能被活化的Cas蛋白非特异切割。本发明巧妙地设计iDNA与靶ssDNA杂交形成具有ssDNA凸起的双链体scDNA，利用scDNA和Cas组成的正反馈核酸回路开发基于Cas的免扩增核酸检测新技术。与大多数CRISPR‑Dx技术相比，本发明具有以下优势：检测快速，仅需15 min即可；检测灵敏度高，比无正反馈的CRISPR/Cas检测高8个数量级。