本发明公开了人乳头病毒16型E7蛋白的制备及其应用，涉及生物领域。本发明联合GST标签和6×His标签作为人乳头病毒16型E7蛋白的纯化标签，提高了可溶性目的蛋白的纯化效率，通过GST纯化和镍柱纯化的方法对目的蛋白进行提纯，采用远超于正常洗脱体积的低浓度咪唑进行洗杂，避免或减少了GST标签非特异性结合镍柱较强难以去除的问题，使其目的蛋白的纯度达到90％以上，为检测血浆中的抗HPV 16 E7的抗体奠定了基础，节约了实验成本。