本发明提供一种高效酶法合成烟酰胺单核苷酸的方法，将PPK2基因和NRK基因构建在同一个pET‑28a(+)载体上，实现2个基因共表达，命名为pET‑28a(+)‑PPK2‑NRK，将质粒pET‑28a(+)‑PPK2‑NRK转到大肠杆菌感受态细胞BL21（ED3）构建重组菌，并进行诱导表达。以NR‑CL、ATP、MgCL2、(NaPO3)6为底物，加入重组菌产生的含PPK2酶和NRK酶的粗酶液催化合成烟酰胺单核苷酸。其中PPK2催化ADP转化为ATP，或者将AMP催化成ADP，再将ADP转化为ATP，使ATP在反应体系中再生循环，NRK催化NR‑CL和ATP合成NMN。称取NR‑CL 390mM，ATP 35mM，MgCL 280 mM，(NaPO3)6 75mM，加适量水溶解，待物质充分溶解后，加入3g/L粗酶液，在40℃恒温水浴锅中，pH7.0条件下反应3h，NMN产量为127.6g/L。