本发明属于生物技术领域，公开了一种靶向HBsAg和pre‑S1的功能性治愈应答标志物的检测试剂盒及其应用，所述试剂盒包括HBsAg和pre‑S1标准品；ELISA板；酶标二抗；试剂：稀释液，封闭液，洗液，底物显色液，终止液。本发明发现HBsAg特异性总抗体、特异性IgG3以及Pre‑S1特异性总抗体、特异性IgG3可作为CHB功能性治愈的早期检测指标。本发明的检测试剂盒及其相应的应用对靶向HBsAg和pre‑S1的功能性治愈应答标志物的检测具有较高的特异性和灵敏度，尤其是在IFN‑α治疗后0‑3个月内，对于HBsAg特异性IgG3含量检测的灵敏度可达到100％。