本发明属于生物技术领域，具体涉及一种牛大力多糖的制备方法和其在抗骨质疏松药物中的应用。该方法包括以下步骤：将牛大力粉末经回流脱脂，得到脱脂牛大力粉；将脱脂牛大力粉与纯水混合，通过超声辅助酶法进行酶解，抽滤，得到滤液；将滤液蒸发浓缩，再加入无水乙醇醇沉，冷冻干燥得到牛大力多糖粗品；将多糖粗品经过除蛋白、脱色，取上清液；将所得上清液进行透析，再加入无水乙醇醇沉，冷冻干燥，得到牛大力多糖。本发明的制备方法实现了牛大力多糖的高效提取分离，并保证其较高的抑制破骨细胞的生长和促进成骨细胞的生长活性，实现抗骨质疏松症的双向代谢调节。