本发明公开了一种凝胶光学试剂盒及其应用，属于检测技术领域，一种凝胶光学试剂盒包括黄嘌呤氧化酶的缓冲液、N‑乙基马来酰亚胺的缓冲液和光学检测水凝胶；所述光学检测水凝胶包括无配体上转换纳米颗粒、Co3O4拟过氧化物纳米酶、显色剂和琼脂糖，光学检测水凝胶固定在离心管盖中。本发明将黄嘌呤氧化酶催化特异性反应、拟过氧化物纳米酶、过氧化物酶催化显色底物和上转换纳米颗粒结合，实现次黄嘌呤的比色、荧光传感，利用手机或相机与Image J等图像分析软件结合。采集和分析光学信号变化，摆脱对大型光学设备的依赖，能够实现次黄嘌呤的定量检测，可作为水产品中次黄嘌呤的现场检测方法应用于水产品新鲜度的判断和品质控制。