本发明公开了一种生物组织拉曼光谱扫描专用载玻片，包括开设有窗口的玻璃片、背照式拉曼增强衬底，所述玻璃片为石英或玻璃，所述玻璃片窗口形状为圆形或长方形，所述背照式拉曼增强衬底为蓝宝石或氟化钙材料，所述背照式拉曼增强衬底厚度为0.1mm~0.2mm，所述背照式拉曼增强衬底表面刻蚀有微结构，本发明的载玻片可采用背照方式探测拉曼光谱，即探测面在工作面的背面，当组织平铺在载玻片衬底上时，既保证探测深度一致，又能保证散射的拉曼光直接被拉曼探头拾取，从而获得生物组织高一致性和高精度拉曼光谱图。