本发明涉及分析检测技术领域。本发明提供了一种花粉变应原制剂中致敏蛋白的定量检测方法，包括：(1)将花粉变应原参考品预处理后，酶解，得到花粉变应原肽段；(2)将花粉变应原肽段进行LC‑MS分析，筛选目标特异性肽段，合成筛选获得的目标特异性肽段的重标肽；(3)将待测花粉变应原制剂预处理后，酶解，得到待测花粉肽段，然后利用步骤(2)合成的重标肽为标准品，进行MRM测定，获得待测花粉变应原制剂中致敏蛋白的绝对含量。本发明所述定量检测方法具有高通量、高灵敏度、高特异性、高准确度、重复性好、稳定可靠、成本低等优点；也进一步实现对花粉变应原制剂的精确质控，推动变应原特异性免疫治疗的精准化。