本发明提供一种红色荧光碳点及其制备方法和应用，所述的碳点是以硫酸耐尔蓝，3‑硝基苯硼酸和4‑吗啉苯胺为原料，通过一步溶剂热法制备得到；该碳点水溶性良好且光学性能稳定，发出红色荧光。本发明碳点的制备方法简便，制得的碳点作为荧光探针能快速进入细胞，并能够靶向溶酶体。此外，该碳点具有极性特异性响应性能，对于不同梯度的极性变化可以表现出不同的光谱性质，并且实现了对细胞和斑马鱼体内溶酶体极性的检测，检测手段简单灵敏。本发明提供的检测极性的方法与传统方法相比，操作简便，且能够实现溶酶体极性变化的监测，具有较好的灵敏度。