本发明公开了多sgRNA介导的EXPERTplus先导基因编辑系统及其应用。本发明为了提升EXPERT系统的编辑效率，在EXPERT系统的基础上，在ori‑sgRNA与expegRNA间增设了多条sgRNA。结果显示，EXPERTplus系统可以进一步提高编辑效率。相比于PE系统，EXPERTplus系统可编辑的范围更广，可以实现88bp的精确替换，且编辑效率更高。此外，由于开发的EXPERTplus系统仅仅只在一条链上产生切口，没有产生DNA双链断裂，相比于PE3与twin PE系统均可能会产生DNA双链断裂，其将产生更低的indels，因此更为安全。