本发明涉及一种基于VIGS的高效高特异性基因沉默本氏烟草方法，目的基因与线性化载体连接方案使用同源重组一步法克隆试剂盒的快速方案进行，采用此方案的前提是PCR产物和线性化载体酶切产物电泳条带均单一，采用此方案进行连接不需要经过胶回收步骤，可以最大程度的保证浓度，提高连接成功率；具体连接体系为：线性化载体体积3μL，目标片段体积1μL，Exnase II体积2μL，5x CE II Buffer体积4μL，ddH2O体积10μL；37℃孵育30分钟；使用SGN VIGS Tool在线软件对插入序列片段进行最优化选择，降低基因沉默‘脱靶’效率。