公开(公告)号：CN117867013A

公开(公告)日：2024-04-12

申请号：CN202311821890.8

申请日：2023-12-27

申请人： 河南省农业科学院烟草研究所

发明人： 李雪君 ,  郭敬 ,  孙计平 ,  孙焕 ,  王亚乐 ,  陈果

IPC分类号： C12N15/83 ,  C12N15/29 ,  A01H5/00 ,  A01H6/82

摘要： 本发明涉及一种基于VIGS的高效高特异性基因沉默本氏烟草方法，目的基因与线性化载体连接方案使用同源重组一步法克隆试剂盒的快速方案进行，采用此方案的前提是PCR产物和线性化载体酶切产物电泳条带均单一，采用此方案进行连接不需要经过胶回收步骤，可以最大程度的保证浓度，提高连接成功率；具体连接体系为：线性化载体体积3μL，目标片段体积1μL，Exnase II体积2μL，5x CE II Buffer体积4μL，ddH2O体积10μL；37℃孵育30分钟；使用SGN VIGS Tool在线软件对插入序列片段进行最优化选择，降低基因沉默‘脱靶’效率。

公开(公告)号：CN116396957A

公开(公告)日：2023-07-07

申请号：CN202310556709.9

申请日：2023-05-17

申请人： 河南省农业科学院烟草研究所

发明人： 连文力 ,  李雪君 ,  孙计平 ,  孙焕 ,  侯咏 ,  王亚乐 ,  武东玲 ,  平文丽

IPC分类号： C12N15/10

摘要： 本发明涉及一种快速提取烟草叶片基因组DNA的方法，剪取100 mg烟草叶片置于离心管中，并放入2颗玻璃珠，加入100μL的DNA抽提缓冲液，放入研磨机进行研磨后得A溶液；加入等体积的异丙醇，振荡混匀后得B溶液；混匀后的B溶液进行离心，移除上清；离心移除上清后的B溶液加入酒精进行清洗，再次离心后移除上清，最后向离心管中加入ddH2O进行溶解，即得烟草DNA；成本低廉，提取时间短，不需转换离心管，减少操作失误安全性高，还可以节约一半的时间成本。