本发明属于非洲猪瘟检测领域，公开了非洲猪瘟多表位重组蛋白ASFVMEA及应用。选择p30、p54、p72、pA104R蛋白的抗原优势表位，对重组抗原构建策略进行了优化与筛选。将表达的非洲猪瘟病毒多表位重组蛋白进行表达纯化并作为包被抗原，建立并优化了间接ELISA检测方法，能够实现对于非洲猪瘟病毒抗体的检测。本发明建立间接ELISA方法，用以检测非洲猪瘟病毒的抗体水平，具有重复性好、特异性强、灵敏度高的特点，操作步骤简单，结果可靠。因此，本发明提供的基于非洲猪瘟病毒多表位蛋白的非洲猪瘟病毒间接ELISA检测试剂盒适合临床大样本的检测，适合大规模推广。