本发明公开山药蛋白DP1及其分离纯化方法和应用。该分离纯化方法包括：(1)以合适的料液比使用Tris‑HCl缓冲液对山药进行浸提以获得山药总蛋白；(2)使用缓冲液配制山药总蛋白溶液，并调节至合适的pH值；(3)采用柱层析对溶液分别进行蛋白的分离和脱盐处理，得到山药蛋白DP1。本发明的山药蛋白DP1的分离纯化方法工艺简单，操作简便。此外，由本发明分离纯化得到的山药蛋白DP1能够促进或提高生殖功能，预防或治疗勃起功能障碍，恢复氧化损伤海绵体内皮细胞的活力，促进海绵体内皮细胞与海绵体平滑肌细胞交互作用，提升海绵体组织中NO/cGMP的水平。