本发明属于植物病害防治技术领域，具体涉及一种钩状木霉T21抗菌肽BⅡ及其制备方法、用途。抗菌肽BⅡ的氨基酸序列为Ac‑Aib‑Gly‑Phe‑Aib‑Aib‑Gln‑Aib‑Aib‑Aib‑Ser‑Leu‑Aib‑Pro‑Val‑Aib‑Iva‑Gln‑Gln‑Leuol；其中，Aib为α‑氨基异丁酸，Ac‑Aib为乙酰化α‑氨基异丁酸。经试验证明，该抗菌肽BⅡ对野油菜黄单胞菌具有较佳的抑制作用，且在室内及田间防效试验中对甘蓝黑腐病表现出较佳的防治效果。