用于检测H5亚型禽流感病毒的试剂盒及其使用方法和应用，属于基因检测技术领域。本发明为了解决现有技术中缺乏高灵敏性、高特异性和高便捷性的H5亚型禽流感病毒检测方法，提供了一种用于检测H5亚型禽流感病毒的试剂盒；通过检索筛选HA基因共同保守片段，并以其为模板设计试剂盒中的RT‑RPA引物和crRNA。本发明提供的用于检测H5亚型禽流感病毒的试剂盒，对检测环境和设备的要求较低，有利于在硬件资源有限的环境下开展检测，适用于基层医疗人员开展快速及时的病毒检测。