本发明涉及基因工程技术领域，特别是涉及一种基于RAA‑CRISPR/Cas12a检测杂交鳢弹状病毒的引物对、体系、试剂盒和应用。所述引物对包括引物对1、引物对2、引物对3和引物对4中的任一对。本发明利用HSHRV糖蛋白序列，使用PRIMER 5.0软件，设计4对特异性上下游引物，成功对核酸进行扩增。随后根据设计选择，手动设计特异性crRNA探针，使用阳性样品为模板，分别对引物及探针进行筛选，成功构建特异性、灵敏性、准确性均表现良好的检测方法。可检测出10copies/μL的阳性样品，且只在阳性模板有荧光信号，其他常见水生动物常见病毒均无扩增。在临床样品检测实验中，表现出较好的准确性。