本申请涉及一种乙醛酸和草酸的液相色谱测定方法，属于液相分析技术领域；方法包括：配制得到具有不同浓度的标准溶液，标准溶液包括乙醛酸标准溶液和草酸标准溶液；对具有不同浓度的标准溶液进行液相色谱测定，得到具有不同浓度的标准溶液对应的标准峰面积；根据标准峰面积及其对应的浓度，得到峰面积Y关于标准溶液浓度X的标准曲线方程；对待测样品进行液相色谱测定，待测样品为乙醛酸和草酸的混合液：得到待测样品对应的待测峰面积；根据待测样品对应的待测峰面积和标准曲线方程，得到乙醛酸和草酸的浓度；通过控制液相色谱测定的条件可将乙醛酸、草酸有效地分离，适用于乙醛酸和草酸混合液的测定。