本发明涉及微生物腐熟剂技术领域，具体是一种用于鸡粪腐熟的腐熟剂及其制备方法和应用。腐熟剂包菌株编号为ACCC 10488的玫瑰色考克氏菌、菌株编号为ACCC 60364的枯草芽孢杆菌、菌株编号为ACCC 32584的长枝木霉和菌株编号为ACCC 11118的植物乳杆菌，腐熟剂中活菌含量大于1×108cfu/g。本发明提供的腐熟剂具备降低鸡粪挥发性有机化合物(VOC)的功能，在鸡粪腐熟过程中实现解磷解钾、杀死微生物虫卵的相关功能，将鸡粪中所含微量元素进行有效利用，用于鸡粪发酵、生物有机肥、微生物菌剂及环境治理等多个领域。