本发明属于蛋白质工程和基因工程技术领域，具体涉及一种重组透皮类胶原蛋白及其制备方法和应用。本发明获得一段全新重组类胶原蛋白序列，其核苷酸序列经密码子偏好性优化，而后在序列N端引入穿膜肽SPACE，同时构建了高产重组类胶原蛋白的工程酵母菌株及高产重组透皮类胶原蛋白的工程酵母菌株，上述两株工程菌均能被成功发酵制备重组胶原蛋白。本发明制备得到的重组类胶原蛋白Col7和重组透皮类胶原蛋白SPACE‑Col7与市售的重组胶原蛋白相比，具备更好的屏障修复性能，且重组透皮类胶原蛋白SPACE‑Col7的透皮性能优于重组类胶原蛋白Col7，解决了目前胶原蛋白透皮难的问题，因此具有良好的实际应用之价值。