本发明适用于生物技术领域，提供了一种固定化双酶及其制备方法和应用，本发明选用ZIF‑8作为载体，采用包埋法成功固定CbCBP酶，继而通过在ZIF‑8骨架的2‑甲基咪唑上共价键结合Ni2+，并利用Ni2+的亲和性将带有His标签的AcCel9A酶特异性地固定在表面，从而实现双酶共固定。本发明提供的方法合成了一种新型的区室化固定化双酶，不仅有效解决了糖供体成本高昂的问题，同时也为转糖基修饰领域开辟了新的研究路径。本发明有效提高了酶的重复利用性及稳定性，提高了酶催化反应的经济效益。同时能够在更广泛的底物范围内实现精准的转糖基调控。本发明合成了氟代脱氧纤维二糖（FDC），是一种具有潜力的新型示踪剂。