本发明公开了一种透解祛瘟制剂中五种成分含量的测定方法及其应用，其是先对待测透解祛瘟制剂供试品溶液进行HPLC检测，得到连翘苷的含量；再根据公式(Ci/W)×(Ar/Ai)×V×D×Fi/r，计算待测透解祛瘟制剂中连翘酯苷I、连翘酯苷A、(+)松脂素‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷、连翘脂素的含量。本发明建立了一种一测多评方法测定透解祛瘟制剂多成分含量的方法，极大地提升了透解祛瘟制剂的质量控制水平，也满足了相关科学内涵研究需要，且本发明的方法实用性高、节约成本、稳定可控。