本申请公开了一种环氧化物水解酶突变体、制备方法及其应用，环氧化物水解酶为EHs‑2，环氧化物水解酶突变体突变位点如下:将EHs‑2的第38位H突变为I，将EHs‑2的第41位H突变为R，将EHs‑2的第71位H突变为V，将EHs‑2的第117位K突变为L，将EHs‑2的第187位L突变为F，将EHs‑2的第244位S突变为A，相比于EHs‑2，本发明对于外消旋环氧苯乙烷的催化活力提升1.8‑10.3倍，合成的(R)‑环氧苯乙烷和(R)‑1‑苯基‑1,2‑乙二醇的ee值分别在99％和98％以上，本发明在高效催化外消旋环氧苯乙烷制备(R)‑环氧苯乙烷和(R)‑1‑苯基‑1,2‑乙二醇的应用中展现了良好的工业化潜力和商业价值。