本发明公开了一种蛇毒类凝血酶蛋白及其制备方法与应用。属于蛇毒蛋白技术领域。本发明采用SUPERDEX 75INCREASE 10/300GL凝胶层析柱和C18SP‑100‑5‑ODS‑P液相色谱柱从尖吻蝮蛇蛇毒中分离纯化了一种具有凝血酶活性的蛋白3185，蛋白质谱鉴定结合转录本数据分析该蛋白肽段数为10，氨基酸数为260，蛋白分子量为29.1KDa，等电点为8.18。酶活法测得酶比活为1032U/mg。该蛋白与凝血酶特异性发色底物S‑2238反应，且反应符合酶动力学。该蛋白仅作用于纤维蛋白原的Aα链，释放纤维蛋白多肽A形成结构疏松纤维蛋白原单体，形成可溶性的纤维蛋白降解产物。