本发明提供了一种青霉素的纯化分离方法，包括以下步骤：S1、准备青霉素发酵液：将青霉素生产菌株培养在含有适当营养物质的培养基中，使得青霉菌株生长并产生青霉素；S2、除杂质初步净化：收集发酵液后，进行初步处理以去除大部分杂质；S3、溶剂萃取：使用有机溶剂对初步净化后的发酵液进行萃取，青霉素在有机溶剂中溶解，实现青霉素与杂质的分离；S4、相分离：将溶剂中的青霉素与水通过离心或分液漏斗进行分离；S5、溶剂回收：将有机溶剂回收并以便再次使用；S6、精制净化：对分离后的青霉素溶液进行进一步净化，去除残留的杂质。青霉素纯化分离后得到的产品具有更高的纯度和更好的质量，能够满足医药行业的严格要求，确保药品的安全性和有效性。