本发明的目的在于提供一种可注射仿生润滑两性离子水凝胶关节注射液的制备方法：将PEGDA分散在溶剂中，并与两性离子化合物单体的水溶液混合，加入引发剂反应得到超支化两性离子聚合物；配制超支化两性离子聚合物和软骨修复药物的混合水溶液，作为溶液A；配制巯基化透明质酸的水溶液，作为溶液B；将溶液B加入至溶液A中，混合后静置成胶，得到两性离子水凝胶关节注射液。本发明还公开了上述制备方法得到的可注射仿生润滑两性离子水凝胶关节注射液及其在制备治疗或预防关节软骨损伤和骨关节炎产品中的应用。本发明提供的制备方法简单快速高效，制备得到的水凝胶关节注射液应用在制备治疗或预防关节软骨损伤和骨关节炎产品中具有更优异的润滑性能。