本发明提供了一株分泌乙氧基喹啉单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，属于免疫化学技术领域，该杂交瘤细胞株已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.45907。本发明通过合成乙氧基喹啉半抗原，制备乙氧基喹啉完全抗原，所得的单克隆抗体对乙氧基喹啉具有较好的检测灵敏度，IC50值为7.14ng/mL，为实现乙氧基喹啉的高灵敏度、高特异性的免疫分析方法的建立提供了核心生物原材料，可用于制备芯片、试纸条和试剂盒等不同形式的乙氧基喹啉检测产品。