本发明涉及病毒检测技术，旨在提供一种用于TaqMan荧光定量PCR法检测猪痘病毒的试剂盒。包括：反应总体积1/2的2×Premix Ex Taq酶；浓度各为10μmol/L的上游引物和下游引物；该两条引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示，用于在PCR扩增过程中特异性扩增猪痘病毒中央编码区外围C20L‑C1L序列中的ORF16基因；浓度为10μmol/L的探针，其核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；标准阳性模版，其浓度按定量标准曲线制备的要求系列稀释；余量为无菌双蒸水。本发明基于对病毒靶向基因的核苷酸进行检测，操作简便、快速；特异性好，灵敏度高。由于不受培养条件限制定量检测，能真实反映猪痘病毒发生感染的情况；可对猪痘病毒进行快速定量检测，适于在临床实验室广泛推广应用。