本发明属于化工检测分析领域，具体涉及一种高效液相色谱测定甘氨酸合成甘氨酸酐反应过程中产物甘氨酸酐收率的方法。以水和甲醇做为流动相，加入离子对试剂为稳定剂，以有机盐为缓冲盐调节PH，使用UltiMate 3000色谱柱分离并测定甘氨酸和甘氨酸酐含量。本发明中，由于反应过程中反应产物甘氨酸酐在同波长下有较强地紫外吸收，且其和原料甘氨酸极性相近，出现保留时间相近，出峰拖尾且随着反应产物的增加检测稳定性不好的现象。通过调节液相色谱条件，采用本方法可快速、准确的测出甘氨酸和甘氨酸酐含量，为甘氨酸合成甘氨酸酐生产工艺参数的调整提供及时准确的数据指导。