本发明公开了一种大菱鲆弹状病毒毒株及其制备方法和应用，大菱鲆弹状病毒毒株Scophthalmus maximus rahbdovirus，SMRV0207，CCTCC NO：V202006。将患病大菱鲆的肝、肾、心、脾组织取出后，剪碎、加入PBS进行匀浆，再加入双抗，置冰箱冰冻，取出融化后，离心，再将病毒粗提液经过滤后，分别接种到CLC0207细胞中，恒温继续培养。本方法易行，该病毒株在CLC0207细胞中能迅速增殖，增殖效价可达到108TCID50/ml，该病毒株可应用于海水鱼弹状病毒细胞工程疫苗制备。