小麦矮腥黑穗病菌实时荧光PCR固相化试剂盒及其检测方法
摘要:
本发明依据随机引物介导的多聚酶链式反应(RM-PCR),从美国小麦矮腥黑穗菌(Tilletia controversa Kuhn TCK)基因组DNA中克隆鉴定的端粒相关序列特征片段;并研制出基于差异片段序列的特异性引物、探针和实时荧光PCR固相化试剂盒,用于TCK冬孢子或侵染菌丝体等不同样品诊断、鉴定的快速检测方法,从样品制备到检测结果的全过程仅需4小时,固相化试剂盒灵敏度高(几百个拷贝)、特异性强(仅检出TCK)、稳定可靠。该发明可以准确地区分TCK与近源种腥黑穗菌如小麦网腥黑穗菌(Tilletiatriticii Tul,TCT),解决了形态学鉴定既费时且不准确的难题,可以满足进境疫麦的快速鉴定和后期监管的需求,适用于小麦矮腥黑穗病的早期诊断,麦粒包装等带菌材料的分子检验和近缘种的诊断鉴定。
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