发明公开
EP0563527A1 Verfahren zum Auffinden von Insertionselementen (IS-Elemente) oder Transposonen
失效
Verfahren zum Auffinden von Insertionselementen（IS-Elemente）oder Transposonen。
- 专利标题： Verfahren zum Auffinden von Insertionselementen (IS-Elemente) oder Transposonen
- 专利标题（英）： Process for the detection of insertion elements or transposons
- 专利标题（中）： Verfahren zum Auffinden von Insertionselementen（IS-Elemente）oder Transposonen。
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申请号： EP93101279.3申请日： 1993-01-28
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公开(公告)号： EP0563527A1公开(公告)日： 1993-10-06
- 发明人: Schäfer, Andreas , Seep-Feldhaus, Anna-Hildegard , Jäger, Wolfgang , Kalinowski, Jörn, Dr. , Wohlleben, Wolfgang, Dr. , Pühler, Alfred, Prof. Dr.
- 申请人： Degussa Aktiengesellschaft
- 申请人地址： Weissfrauenstrasse 9 D-60311 Frankfurt DE
- 专利权人： Degussa Aktiengesellschaft
- 当前专利权人： Degussa Aktiengesellschaft
- 当前专利权人地址： Weissfrauenstrasse 9 D-60311 Frankfurt DE
- 优先权： DE4208785 19920319
- 主分类号： C12N15/77
- IPC分类号： C12N15/77 ; C12N15/11 ; C12P19/34
摘要：
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zum Auffinden von Insertionselementen (IS-Elemente) oder Transposonen in coryneformen Bakterien, ein dazu geeignetes positives Selektionssystem, die so gefundenen IS-Elemente und ihre Verwendung.
Das Verfahren umfaßt:
1.1. die Konstruktion eines aus einem E.coli Mobilisatorstamm mobilisierbaren, nicht selbsttransferierbaren Vektors, zusammengesetzt aus
1.1.1 einem DNA-Segment, enthaltend ein in E.coli funktionelles Replikon,
1.1.2 einem zweiten DNA-Segment, enthaltend das für die Mobilisierungsfunktion codierende DNA-Fragment (Mob-site enthaltend den oriT),
1.1.3 einem dritten DNA-Segment, das in Gram-positiven Bakterien homolog rekombiniert und/oder ein in coryneformen Bakterien funktionelles Replikon enthält
1.1.4 einem das sacB-Gen enthaltenden DNA-Segment aus Bacillus subtilis,
1.2. Übertragung dieses Vektors durch konjugativen Transfer in die coryneformen Rezipientenstämme,
1.3. Anzucht der den Vektor enthaltenden Transkonjuganten in einem 10 % Sucrose enthaltenden Nährmedium,
1.4. Lyse der Sucrose-resistenten Klone, Spaltung der Plasmide mit Restriktionsendonucleasen und Analyse der Fragmente.
Das Verfahren umfaßt:
1.1. die Konstruktion eines aus einem E.coli Mobilisatorstamm mobilisierbaren, nicht selbsttransferierbaren Vektors, zusammengesetzt aus
1.1.1 einem DNA-Segment, enthaltend ein in E.coli funktionelles Replikon,
1.1.2 einem zweiten DNA-Segment, enthaltend das für die Mobilisierungsfunktion codierende DNA-Fragment (Mob-site enthaltend den oriT),
1.1.3 einem dritten DNA-Segment, das in Gram-positiven Bakterien homolog rekombiniert und/oder ein in coryneformen Bakterien funktionelles Replikon enthält
1.1.4 einem das sacB-Gen enthaltenden DNA-Segment aus Bacillus subtilis,
1.2. Übertragung dieses Vektors durch konjugativen Transfer in die coryneformen Rezipientenstämme,
1.3. Anzucht der den Vektor enthaltenden Transkonjuganten in einem 10 % Sucrose enthaltenden Nährmedium,
1.4. Lyse der Sucrose-resistenten Klone, Spaltung der Plasmide mit Restriktionsendonucleasen und Analyse der Fragmente.
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