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鋳型DNAの製造方法
Abstract:
鋳型DNAの製造方法は、カセット2本鎖DNAを準備する工程(a)と、標的配列含有オリゴヌクレオチドを調製する工程(b)と、それらをDNA結合酵素により連結し、標的配列含有環状体ヌクレオチドを得る工程(c)と、該ヌクレオチドを鋳型として鎖置換型DNAポリメラーゼにより増幅し、サポート配列と、RNAポリメラーゼのプロモーター配列と、標的配列と、sgRNAスキャフォールド配列とからなる反復配列を有する同一配列コンカテマーとなる標的配列含有2本鎖DNAを得る工程(d)と、該2本鎖DNAを同一配列同士の間で切断し、サポート配列とRNAポリメラーゼのプロモーター配列と標的配列とsgRNAスキャフォールド配列とからなる配列を有する鋳型DNAを得る工程(e)とを備えている。
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