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公开(公告)号：CN114480352A
公开(公告)日：2022-05-13
申请号：CN202210097345.8
申请日：2022-01-26
申请人： 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
摘要： 本发明主要通过DNA改组技术，利用DNaseI消化地衣芽胞杆菌来源和克劳氏芽胞杆菌来源的碱性蛋白酶基因，纯化回收目的片段，通过无引物PCR和有引物PCR构建碱性蛋白酶突变库，筛选获得了一种碱性蛋白酶活力显著提高的突变体，其氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示。适宜条件下，突变体碱性蛋白酶活力为61.75U/mL，相比野生型有显著提高。
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公开(公告)号：CN112662654A
公开(公告)日：2021-04-16
申请号：CN202110116007.X
申请日：2021-01-28
申请人： 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
摘要： 本发明主要通过DNA改组技术，利用DNaseI消化地衣芽胞杆菌来源和克劳氏芽胞杆菌来源的碱性蛋白酶基因，纯化回收目的片段，通过无引物PCR和有引物PCR构建碱性蛋白酶突变库，筛选获得了一种碱性蛋白酶活力显著提高的突变体，其氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示。适宜条件下，突变体碱性蛋白酶活力为61.75U/mL，相比野生型有显著提高。
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公开(公告)号：CN115125247B
公开(公告)日：2023-10-13
申请号：CN202210671305.X
申请日：2022-06-14
申请人： 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
IPC分类号： C12N15/113 , C12N15/75 , C12N9/56 , C12N1/21 , C12R1/11
摘要： 本发明通过对枯草芽孢杆菌来源的启动子分析改造获得了一种强度提高的新型组合启动子pα2‑α2。本发明还提供包含该组合启动子的表达载体、表达系统。本发明所述组合启动子用于控制基因表达，尤其应用于解淀粉芽孢杆菌代谢工程领域，可将碱性蛋白酶表达活性提高144％，为介导解淀粉芽胞杆菌表达系统中异源碱性蛋白酶基因的表达奠定基础，推动碱性蛋白酶的高效表达及工业化生产。
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公开(公告)号：CN112662652A
公开(公告)日：2021-04-16
申请号：CN202110072841.3
申请日：2021-01-20
申请人： 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
摘要： 本发明主要利用易错PCR技术对来源于克劳氏芽胞杆菌的碱性蛋白酶进行了定向改造，获得了一种胶原降解活力降低的碱性蛋白酶，其氨基酸序列如SEQID NO：4所示。相同条件下，本发明突变体的碱性蛋白酶活力和胶原降解活力分别是野生型的91.97％和65.84％，该蛋白酶在皮革工业中具有较高的应用价值。
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公开(公告)号：CN114480352B
公开(公告)日：2023-07-04
申请号：CN202210097345.8
申请日：2022-01-26
申请人： 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
摘要： 本发明主要通过DNA改组技术，利用DNaseI消化地衣芽胞杆菌来源和克劳氏芽胞杆菌来源的碱性蛋白酶基因，纯化回收目的片段，通过无引物PCR和有引物PCR构建碱性蛋白酶突变库，筛选获得了一种碱性蛋白酶活力显著提高的突变体，其氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示。适宜条件下，突变体碱性蛋白酶活力为61.75U/mL，相比野生型有显著提高。
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公开(公告)号：CN112522173B
公开(公告)日：2023-06-16
申请号：CN202011539757.X
申请日：2020-12-23
申请人： 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
摘要： 本发明目的是通过对基因工程宿主的定向改造，提供一株能够高效稳定生产异源蛋白酶的基因工程菌，以解淀粉芽孢杆菌为宿主，首先将宿主的8种胞外蛋白酶aprE、epr、mpr、vpr、nprE、bpr、wprA、aprX缺失，得到胞外蛋白酶缺陷型菌株；还将宿主的α‑淀粉酶和胞外多糖基因簇eps缺失；还将表达异源碱性蛋白酶的高拷贝质粒导入宿主，得到一株高效生产异源碱性蛋白酶的基因工程菌。并且该工程菌在发酵过程中粘性大大降低，利于产物蛋白酶的分离纯化。
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公开(公告)号：CN115125247A
公开(公告)日：2022-09-30
申请号：CN202210671305.X
申请日：2022-06-14
申请人： 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
IPC分类号： C12N15/113 , C12N15/75 , C12N9/56 , C12N1/21 , C12R1/11
摘要： 本发明通过对枯草芽孢杆菌来源的启动子分析改造获得了一种强度提高的新型组合启动子pα2‑α2。本发明还提供包含该组合启动子的表达载体、表达系统。本发明所述组合启动子用于控制基因表达，尤其应用于解淀粉芽孢杆菌代谢工程领域，可将碱性蛋白酶表达活性提高144％，为介导解淀粉芽胞杆菌表达系统中异源碱性蛋白酶基因的表达奠定基础，推动碱性蛋白酶的高效表达及工业化生产。
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公开(公告)号：CN112522173A
公开(公告)日：2021-03-19
申请号：CN202011539757.X
申请日：2020-12-23
申请人： 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
摘要： 本发明目的是通过对基因工程宿主的定向改造，提供一株能够高效稳定生产异源蛋白酶的基因工程菌，以解淀粉芽孢杆菌为宿主，首先将宿主的8种胞外蛋白酶aprE、epr、mpr、vpr、nprE、bpr、wprA、aprX缺失，得到胞外蛋白酶缺陷型菌株；还将宿主的α‑淀粉酶和胞外多糖基因簇eps缺失；还将表达异源碱性蛋白酶的高拷贝质粒导入宿主，得到一株高效生产异源碱性蛋白酶的基因工程菌。并且该工程菌在发酵过程中粘性大大降低，利于产物蛋白酶的分离纯化。
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公开(公告)号：CN115125248B
公开(公告)日：2024-02-06
申请号：CN202210672777.7
申请日：2022-06-14
申请人： 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
摘要： 本发明通过对枯草芽孢杆菌来源的启动子分析改造获得了一种强度提高的新型组合启动子pctsR‑α2。本发明还提供包含该组合启动子的表达载体、表达系统。本发明所述组合启动子用于控制基因表达，尤其应用于解淀粉芽孢杆菌代谢工程领域，可将碱性蛋白酶表达活性提高110％，为介导解淀粉芽胞杆菌表达系统中异源碱性蛋白酶基因的表达奠定基础，推动碱性蛋白酶的高效表达及工业化生产。
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公开(公告)号：CN115125248A
公开(公告)日：2022-09-30
申请号：CN202210672777.7
申请日：2022-06-14
申请人： 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
摘要： 本发明通过对枯草芽孢杆菌来源的启动子分析改造获得了一种强度提高的新型组合启动子pctsR‑α2。本发明还提供包含该组合启动子的表达载体、表达系统。本发明所述组合启动子用于控制基因表达，尤其应用于解淀粉芽孢杆菌代谢工程领域，可将碱性蛋白酶表达活性提高110％，为介导解淀粉芽胞杆菌表达系统中异源碱性蛋白酶基因的表达奠定基础，推动碱性蛋白酶的高效表达及工业化生产。
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