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公开(公告)号：CN110372769B
公开(公告)日：2020-10-02
申请号：CN201811653139.0
申请日：2018-12-29
申请人： 浙江工业大学 , 浙江绿创生物科技有限公司 , 湖南新合新生物医药有限公司
摘要： 本发明涉及一种甾体发酵后提取新方法，其包括以下工艺步骤：发酵液升温灭活；初始膜水通量的测定，发酵液进行膜过滤收集截留液，再进行膜的清洗，洗至初始膜水通量；所得截留液继续用甲醇萃取，分层得到甾体产品甲醇萃取液，再继续浓缩至粘稠状加水分散过滤得粗品；粗品再用第一种溶剂升温打浆，降温过滤得一精，一精再用第二种溶剂溶解、脱色、重结晶即得成品。本发明设计合理，工艺简单，可操作性强，工作环境毒害性小，不仅避免了传统工艺全萃法的的乳化难分离现象，而且提供了一种新型的分离方法，避免了有毒萃取有机溶剂的使用，解决了废水处理问题。该法成本低，收率高，最终产品符合市场品质要求。
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公开(公告)号：CN110055290A
公开(公告)日：2019-07-26
申请号：CN201810907482.7
申请日：2018-08-10
申请人： 浙江工业大学 , 浙江绿创生物科技有限公司
摘要： 本发明涉及一种固定化酶催化生产左旋多巴的方法，其特征在于：(1)挑单菌落接种到含LB培养基的试管中，加氨苄青霉素(100mg/L)30-37℃，220rpm，培养12-16h，得到一级种子；(2)将所述一级种子接种到含发酵培养基的摇瓶中培养10-12h；(3)离心收菌，得到菌体，压榨破胞，加壳聚糖溶液絮凝，高速离心，获得上清酶液，加入固定化载体EP200，25℃搅拌混合12-24h，三足式离心收集固定化酶，用50mM的磷酸钾缓冲液(pH8.0)，多次洗涤，过滤，获得固定化酶；(4)固定化酶20g，加入底物溶液，搅匀，25℃，密封震荡反应；所述底物溶液包括14-16g/L的丙酮酸钠、10-12g/L的邻苯二酚、40-45g/L的氯化铵、2-5g/L的亚硫酸钠、1-3g/L的EDTA，调pH7.5-8.5。
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公开(公告)号：CN110031583B
公开(公告)日：2022-01-18
申请号：CN201811629727.0
申请日：2018-12-29
申请人： 浙江工业大学 , 浙江绿创生物科技有限公司
IPC分类号： G01N30/88
摘要： 本发明涉及一种分离测定N‑琥珀酰色氨酸对映异构体的液相色谱方法，现有的检测方法效率较低，准确度较差。本发明是采用蛋白键合型手性色谱柱，其主要包括以乙酸铵‑乙腈为流动相，对N‑琥珀酰‑色氨酸对映异构体进行分离测定。本发明N‑琥珀酰色氨酸对映异构体的高效液相分离检测方法，能够有效分离和测定N‑琥珀酰色氨酸对映异构体，专属性强，准确度高，可用于N‑琥珀酰色氨酸对映异构体的定性和定量。
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公开(公告)号：CN110055292A
公开(公告)日：2019-07-26
申请号：CN201810907765.1
申请日：2018-08-10
申请人： 浙江工业大学 , 浙江绿创生物科技有限公司
摘要： 本发明涉及一种丙酮酸和左旋多巴联产工艺与应用。采取如下的技术方案：(1)利用光滑球拟酵母发酵获得丙酮酸料液，料液经过陶瓷膜除菌，超滤膜除蛋白、核酸、色素等大分子；(2)根据丙酮酸的摩尔量向丙酮酸浓缩液加入一定量的邻苯二酚、醋酸铵、EDTA、亚硫酸钠等化合物，调pH7.0-9.0，配制成酶催化底物溶液；(3)利用酪氨酸酚裂解酶基因工程菌发酵获得酪氨酸酚裂解酶菌液，离心收菌体，高压均质机破胞，离心，收集酶液；(4)酶液加入一定量的底物溶液，搅匀，25℃，密封震荡反应；所述底物溶液为丙酮酸浓缩液配制,通过流加底物溶液控制邻苯二酚的浓度0-10g/L，产物达到120g/L以上，停止流加底物溶液，当反应液中邻苯二酚含量低于0.2g/L，停止反应。
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公开(公告)号：CN110031583A
公开(公告)日：2019-07-19
申请号：CN201811629727.0
申请日：2018-12-29
申请人： 浙江工业大学 , 浙江绿创生物科技有限公司
IPC分类号： G01N30/88
摘要： 本发明涉及一种分离测定N-琥珀酰色氨酸对映异构体的液相色谱方法，现有的检测方法效率较低，准确度较差。本发明是采用蛋白键合型手性色谱柱，其主要包括以乙酸铵-乙腈为流动相，对N-琥珀酰-色氨酸对映异构体进行分离测定。本发明N-琥珀酰色氨酸对映异构体的高效液相分离检测方法，能够有效分离和测定N-琥珀酰色氨酸对映异构体，专属性强，准确度高，可用于N-琥珀酰色氨酸对映异构体的定性和定量。
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公开(公告)号：CN109867663A
公开(公告)日：2019-06-11
申请号：CN201811631577.7
申请日：2018-12-29
申请人： 浙江工业大学 , 浙江绿创生物科技有限公司
IPC分类号： C07D407/04
摘要： 本发明涉及一种金黄霉素A和金黄霉素B的分离纯化方法。现有方法中有机溶剂回收条件要求高，上样量小，收率低，成本高。本发明的技术方案如下：[1]将金黄霉素A、B发酵液板框过滤，得到湿菌渣。[2]用有机溶剂萃取湿菌渣，过滤得到提取液。[3]将提取液真空浓缩，加入非水溶性有机溶剂溶解。[4]静止分层，收集非水溶性有机溶剂层。[5]加活性炭、无水硫酸钠脱色后抽滤，滤液真空浓缩。[6]加有机溶剂溶解。[7]上制备色谱分离。本发明分离纯化金黄霉素A、B的方法操作简单，有机溶剂用量少，避免了因使用大孔树脂、硅胶或有机溶剂结晶而产生大量废水和有机溶剂。
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公开(公告)号：CN109439605A
公开(公告)日：2019-03-08
申请号：CN201810455195.7
申请日：2018-05-14
申请人： 浙江工业大学 , 浙江绿创生物科技有限公司
摘要： 本发明涉及一种工程菌及其构建方法，具体是一种提高酪氨酸酚裂解酶稳定性的工程菌及其构建方法与应用，属于基因工程技术领域。该工程菌经鉴定为大肠埃希氏菌，命名为大肠埃希氏菌Trx-TPL(Escherichia coli Trx-TPL)，保存于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉，武汉大学，保藏日期为2017年11月13日，保藏编号为CCTCC NO：M2017684。本发明将两个酪氨酸酚裂解酶基因与硫氧还原蛋白基因连接在一起构建表达质粒，可以有效提高表达的酶的稳定性，尤其是热稳定性，可以在提供相关底物下，延长转化合成左旋多巴的时间，增加底物浓度，工艺简单，成本低廉，产率高，具有工业化生产的应用价值。
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公开(公告)号：CN108218077A
公开(公告)日：2018-06-29
申请号：CN201711497937.4
申请日：2017-12-29
申请人： 浙江工业大学 , 浙江绿创生物科技有限公司
IPC分类号： C02F9/10 , C02F101/10 , C02F103/36
摘要： 本发明提供了一种硫化氢去除和吡啶回收的方法。包括以下工艺步骤：在废水中加入双氧水，双氧水的用量为硫离子mol数的2～8倍，进行反应，加固体氢氧化钠调pH至7～10，再进行充分蒸馏，残留物为无机盐和硫磺；馏分加1～4倍的30～60％氢氧化钠溶液脱水分层，下层碱液打入蒸馏釜蒸馏后得到浓碱(30～60％氢氧化钠)，继续下一批套用，上层直接打入精馏塔进行精馏，收集115℃前的馏分与脱硫后的馏分一起再次脱水，收集115℃后的馏分，即得工业吡啶产品。本发明设计合理，工艺简单，可操作性强，工作环境毒害性小，不仅解决了6‑硫鸟嘌呤生产废水的排放问题，还提供了一种吡啶回收率高的方法，该法成本低，回收吡啶含量99％以上，水分不超过0.2％，达到了工业应用标准。
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公开(公告)号：CN108218077B
公开(公告)日：2020-10-30
申请号：CN201711497937.4
申请日：2017-12-29
申请人： 浙江工业大学 , 浙江绿创生物科技有限公司
IPC分类号： C02F9/10 , C02F101/10 , C02F103/36
摘要： 本发明属于工业废水的处理技术领域，具体涉及一种从6‑硫鸟嘌呤生产废水中去除硫离子并回收吡啶的方法：(1)对废水中吡啶和硫离子含量进行测定，在废水中加入双氧水氧化脱硫，双氧水的用量为硫离子摩尔数的2～8倍，进行反应，反应温度为10～60℃，反应结束后，再加固体氢氧化钠调pH至7～10，再进行蒸馏获得脱硫后的馏分；(2)根据脱硫后馏分的量，加入1～4倍体积的氢氧化钠溶液搅拌1‑1.5h，静置分层，上层料液再次精馏，收集115℃后的馏分，获得吡啶产品，本发明设计合理，工艺简单，工作环境毒害性小，硫化氢去除率高，吡啶回收率高，回收吡啶含量99％以上，水分不超过0.2％，达到了6‑硫鸟嘌呤生产原料吡啶的品质要求，也达到了工业标准。
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公开(公告)号：CN110055292B
公开(公告)日：2020-06-19
申请号：CN201810907765.1
申请日：2018-08-10
申请人： 浙江工业大学 , 浙江绿创生物科技有限公司
摘要： 本发明涉及一种丙酮酸和左旋多巴联产工艺与应用。采取如下的技术方案：(1)利用光滑球拟酵母发酵获得丙酮酸料液，料液经过陶瓷膜除菌，超滤膜除蛋白、核酸、色素等大分子；(2)根据丙酮酸的摩尔量向丙酮酸浓缩液加入一定量的邻苯二酚、醋酸铵、EDTA、亚硫酸钠等化合物，调pH7.0‑9.0，配制成酶催化底物溶液；(3)利用酪氨酸酚裂解酶基因工程菌发酵获得酪氨酸酚裂解酶菌液，离心收菌体，高压均质机破胞，离心，收集酶液；(4)酶液加入一定量的底物溶液，搅匀，25℃，密封震荡反应；所述底物溶液为丙酮酸浓缩液配制,通过流加底物溶液控制邻苯二酚的浓度0‑10g/L，产物达到120g/L以上，停止流加底物溶液，当反应液中邻苯二酚含量低于0.2g/L，停止反应。
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