NK细胞的体外三维扩增培养方法

    公开(公告)号:CN105441390A

    公开(公告)日:2016-03-30

    申请号:CN201510796650.6

    申请日:2015-11-18

    发明人: 曾宪卓 鲁菲

    IPC分类号: C12N5/0783

    摘要: 本发明涉及一种NK细胞的体外三维扩增培养方法,所述培养方法包括以下步骤:获取NK细胞;将所述NK细胞接种于三维培养支架中进行体外三维扩增培养;其中,三维培养支架为壳聚糖-海藻酸钠支架。通过利用壳聚糖-海藻酸钠支架的多孔隙结构及其机械性能和生物相容性,扩大了NK细胞的生长空间及与营养物质的接触面积,也可使得NK细胞能够均匀分布在壳聚糖-海藻酸钠支架中,从而能够提高NK细胞的细胞活性,有利于提高NK细胞的扩增率及其杀伤活性;从而解决了现有技术中采用饲养细胞于二维环境中培养NK细胞存在的NK细胞活性差、扩增率低等缺陷。

    脱乙酰几丁质/海藻酸钠干细胞微囊及其制备和培养方法

    公开(公告)号:CN105274084A

    公开(公告)日:2016-01-27

    申请号:CN201510675698.1

    申请日:2015-10-15

    发明人: 曾宪卓 鲁菲

    摘要: 本发明提供了一种脱乙酰几丁质/海藻酸钠干细胞微囊及其制备和培养方法,制备方法包括:将海藻酸钠于水中分散后再加入待培养的干细胞,制成海藻酸钠和细胞的混合悬液;将脱乙酰几丁质用醋酸盐缓冲液分散,制成脱乙酰几丁质溶液;将混合悬液加入至所述脱乙酰几丁质溶液中进行凝聚。本发明制备微囊相比通常的聚赖氨酸/海藻酸钠细胞培养微囊,其包膜结构采用脱乙酰几丁质和海藻酸钠形成,两者不仅阴阳离子电性结合,还进一步利用脱乙酰几丁质的强吸附性,提升结合形成的包膜的强度,可以防止其在培养过程中被降解。具有更良好的溶胀、缩胀等稳定性能,能形成较好的细胞生长环境,提升细胞培养扩增的效率。

    CIK及其制备方法
    95.
    发明公开

    公开(公告)号:CN105154398A

    公开(公告)日:2015-12-16

    申请号:CN201510425461.8

    申请日:2015-07-17

    发明人: 曾宪卓 成杰

    IPC分类号: C12N5/0783

    摘要: 本发明提供一种CIK制备方法及由该方法制备的CIK,方法包括:获取单个核细胞,并用400~600U/mL的r-干扰素进行初次诱导培养后、继续第二次诱导培养和第三次诱导培养;其中,第二次诱导培养于200~300U/mL的r-干扰素、90~110ng/mL的CD3单抗、90~110ng/mL的CD28单抗、8~12ng/mL的IL-1a和450~550U/mL的IL-2条件进行;第三次诱导培养于40~60U/mL的r-干扰素、15~25ng/mL的CD3单抗、15~25ng/mL的CD28单抗、3.2~4.8ng/mL的IL-1a、450~550U/mL的IL-2和450~550U/mL的IL-15条件进行。本发明用不同条件进行分步诱导,使细胞性状稳定,从而最终收获到增值倍数较高的性状多样稳定的CIK细胞。

    脐带间充质干细胞的大量培养方法

    公开(公告)号:CN105112360A

    公开(公告)日:2015-12-02

    申请号:CN201510423138.7

    申请日:2015-07-17

    发明人: 曾宪卓 黄海军

    IPC分类号: C12N5/0775

    摘要: 本发明提供了一种脐带间充质干细胞的大量培养方法,包括:获取脐带沃顿胶;将脐带沃顿胶进行P0代培养至细胞融合度为40%~50%后,传P1代培养至细胞融合度为85%~95%;将P1代细胞于平板培养基进行接种培养,分离未被平板培养基粘附的悬浮细胞;将悬浮细胞于含有白血病抑制因子和成纤维样生长因子的培养基传P2代培养。本发明的上述组织贴壁培养的方法,将早期发生多向性变化较低的P0细胞直接培养至P1代后,用组织培养平板进行粘附筛选,保持细胞分化度的均一;之后用白血病抑制因子和成纤维样生长因子增加细胞在P2代培养中的贴壁性能以及抑制分化,从而得到分化度较低且趋于一致、贴壁能力较强利于收集的脐带间充质干细胞的。

    纤维蛋白凝胶-聚乳酸复合支架及其制备方法

    公开(公告)号:CN105107027A

    公开(公告)日:2015-12-02

    申请号:CN201510423126.4

    申请日:2015-07-17

    发明人: 曾宪卓 鲁菲

    IPC分类号: A61L27/48 A61L27/56 A61L27/50

    摘要: 本发明提供了一种纤维蛋白凝胶-聚乳酸复合支架及其制备方法,其中制备方法包括:获取聚乳酸多孔支架;将聚乳酸多孔支架用氢氧化钠进行表面活化处理;将表面处理后的聚乳酸多孔支架用聚丙烯酸钠进行表面接枝;向表面接枝后的聚乳酸多孔支架的孔隙内填充纤维蛋白凝胶。本发明的制备方法,采用聚乳酸多孔支架和纤维蛋白凝胶这两者进行组合得到复合支架,并且根据实施中的目的要求,分别对聚乳酸多孔支架进行表面改性和接枝处理,提升其亲和性和细胞吸附性,并增强水分保持能力,利于保证纤维凝胶的形态和功效水平,且具有更好地机械性能。

    无血清培养基及干细胞的培养方法

    公开(公告)号:CN105087481A

    公开(公告)日:2015-11-25

    申请号:CN201510519825.9

    申请日:2015-08-21

    发明人: 曾宪卓 鲁菲

    IPC分类号: C12N5/0775

    摘要: 本发明涉及一种无血清培养基,包括基础培养基,胰岛素、含铁的食品添加剂、亚硒酸钠、纤粘连蛋白、胰高血糖素、肝细胞生长因子和青链霉素等。同时,本发明还公开了一种干细胞的培养方法,包括如下步骤:获取干细胞,采用本发明提供的无血清培养基进行体外培养。通过本发明提供的无血清培养基所获得的细胞,不仅可避免血清培养基所携带的病原体污染造成纯化细胞困难的问题,而且能够提高细胞生产的稳定性、提高细胞增殖量,以及增强细胞活性。

    3D免疫细胞培养支架及其制备方法

    公开(公告)号:CN105087381A

    公开(公告)日:2015-11-25

    申请号:CN201510541204.0

    申请日:2015-08-28

    发明人: 曾宪卓 鲁菲

    IPC分类号: C12M3/00 C07K1/00 A61L31/04

    摘要: 本发明提供了一种3D免疫细胞培养支架及其制备方法,方法步骤包括:获取胶原蛋白;将胶原蛋白用0.03~0.06mol/L的醋酸溶解,制成质量分数1~2%的胶原溶液;将胶原溶液冷冻成型,获得胶原块;将胶原块进行真空干燥,获得胶原海绵体;将胶原海绵体于100~110℃下进行真空热交联。本发明的上述胶原支架的制备方法,相比其他的普通的培养载体,其针对于DC细胞在体内的间质环境,采用胶原蛋白制成多孔隙的柔性支架,胶原蛋白的纤维粘性可以提升DC的吸附效果,从而使半贴壁类型的DC能具有全贴壁的能力;并且通过海绵体的复水和亲和特性制备的支架具有的多孔隙的微孔环境,可以用来固定细胞的作用,从而提升DC和CIK的接触。

    诱导液和诱导培养基及诱导培养间充质干细胞的方法

    公开(公告)号:CN105062951A

    公开(公告)日:2015-11-18

    申请号:CN201510477274.4

    申请日:2015-08-06

    发明人: 曾宪卓 鲁菲

    IPC分类号: C12N5/071

    摘要: 本发明涉及一种诱导液和诱导培养基及诱导培养间充质干细胞的方法,该诱导液包括尼克酰胺和β-细胞调节素;该诱导培养基包括上述诱导液和基础培养基,能够促进MSC细胞的增殖分化,提高细胞活性及胰岛细胞的成熟度。因此,采用本发明提供的诱导培养胰岛细胞的方法所获得的胰岛细胞不仅数量较多,胰岛细胞的成熟度及活性较高,质量较好,能够分泌较多的胰岛素,对于临床移植MSC治疗1型糖尿病具有重要意义。