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公开(公告)号：CN103805545B
公开(公告)日：2016-11-02
申请号：CN201410055749.6
申请日：2014-02-19
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种氧化葡萄糖酸杆菌无抗性标记基因敲除体系，属于基因工程技术领域。本发明通过同源重组技术，将G.oxydans中upp基因进行敲除，得到一upp基因缺陷型菌株；同时构建了含有一个能在G.oxydans中良好转录表达并具有条件致死功能的upp基因、一个用于G.oxydans转化子选择的抗性标记卡那霉素标记抗性基因及一个MCS多克隆位点的重组整合质粒。该质粒适用于G.oxydans染色体基因敲除和替代，相比使用抗性标记基因作为筛选标记进行基因敲除有以下两点优势：不将抗性基因引入G.oxydans基因组中，避免了抗性基因对上下游基因产生极性作用；利用该敲除体系可以在同一菌株中进行多次染色体基因敲除和替代。
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公开(公告)号：CN103865864B
公开(公告)日：2016-09-07
申请号：CN201410076587.4
申请日：2014-03-04
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种代谢工程改造大肠杆菌产圣草酚的方法，属于代谢工程领域。本发明通过基因工程技术，在大肠杆菌中将截去膜结合序列的黄酮3’羟化酶基因tF3’H和P450还原酶基因tCPR两个基因融合表达，成功实现了柚皮素转化圣草酚的步骤。同时表达来自R.glutinis的酪氨酸解氨酶基因TAL，P.crispum的4‑香豆酸：辅酶A连接酶基因4CL，P.hybrida的査尔酮合成酶基因CHS和M.sativa的查尔酮异构酶基因CHI实现由酪氨酸直接生产柚皮素，从而构建得到由酪氨酸直接生产圣草酚的工程菌株。为进一步提高圣草酚产量，本发明敲除了大肠杆菌基因组中的乙酸激酶ackA基因，并过量表达乙酰辅酶A合成酶基因acs和乙酰辅酶A羧化酶基因ACC，最终圣草酚的产量可达106.7mg/L。
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公开(公告)号：CN103923863B
公开(公告)日：2015-12-09
申请号：CN201410169821.8
申请日：2014-04-24
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种提高大肠杆菌对黄酮类化合物耐受性的方法，属于遗传工程领域。本发明通过蛋白质组学方法发现FadL表达量的增加能够缓解E.coli在黄酮类化合物存在的不利环境中的生长，也即是FadL蛋白可以提高E.coli对黄酮类化合物的耐受性，然后通过基因工程技术，将来源于E.coli BL21(DE3)的fadL基因过量表达于E.coli BL21(DE3)中，获得一株能耐受黄酮类化合物的工程菌，外源添加黄酮类化合物于E.coli生长环境中，相较于原始菌，工程菌的最大比生长速率相较于原始菌提高了2.53倍。
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公开(公告)号：CN103484391B
公开(公告)日：2015-03-25
申请号：CN201310481832.5
申请日：2013-10-15
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12P7/50 , C07K14/39 , C12N1/16 , C12N15/815
Abstract: 本发明公开了一种胞外α-酮戊二酸产量提高的解脂亚洛酵母基因工程菌，属于代谢工程领域。本发明从Yarrowia lipolytica CLIB122全基因组范围内的6611条蛋白质编码序列中筛选得到4条编码转运蛋白的基因，通过在解脂亚洛酵母（Y.lipolytica）WSH-Z06中分别过量表达这4个基因，获得了细胞外α-酮戊二酸含量提高的重组菌。本发明通过过量表达这类基因增强了细胞将α-酮戊二酸转运至细胞外能力，降低下游分离纯化成本。
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公开(公告)号：CN103923864A
公开(公告)日：2014-07-16
申请号：CN201410169822.2
申请日：2014-04-24
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一株高黄酮类化合物耐受性大肠杆菌工程菌及其构建方法和应用，属于遗传工程领域。本发明以可用于黄酮生产的大肠杆菌生产菌株为受体，将其malE基因进行沉默获得，能显著提高E.coli对黄酮类化合物的耐受性，外源添加黄酮类化合物刺激E.coli生长，相较于原始菌，工程菌的最大比生长速率相较于原始菌提高了2.07倍。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN103923862A
公开(公告)日：2014-07-16
申请号：CN201410169642.4
申请日：2014-04-24
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一高黄酮类化合物耐受性大肠杆菌及其构建方法，属于遗传工程领域。本发明以可用于黄酮生产的大肠杆菌生产菌株为受体，将其malE基因进行沉默获得，能显著提高E.coli对黄酮类化合物的耐受性，外源添加黄酮类化合物刺激E.coli生长，相较于原始菌，工程菌的最大比生长速率相较于原始菌提高了2.15倍。
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公开(公告)号：CN103911390A
公开(公告)日：2014-07-09
申请号：CN201410168373.X
申请日：2014-04-24
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种通过调节OmpA表达提高大肠杆菌黄酮类物质耐受性的方法，属于遗传工程领域。本发明以可用于黄酮生产的大肠杆菌生产菌株为受体，将其OmpA基因进行沉默获得，能显著获得一株能耐受黄酮类化合物的工程菌，外源添加黄酮类化合物于E.coli生长环境中，相较于原始菌，工程菌的最大比生长速率相较于原始菌提高了2.35倍。
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公开(公告)号：CN102660599B
公开(公告)日：2014-06-18
申请号：CN201210145148.5
申请日：2012-05-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种采用自克隆工程菌发酵生产L-山梨糖的方法，属于采用代谢工程调控策略优化发酵过程技术领域。本发明采用代谢工程的手段，获得自克隆氧化葡萄糖酸杆菌工程菌，以其为生产菌株，通过发酵工艺优化使山梨醇脱氢酶的活性提高了1.33倍；以山梨醇为唯一碳源，发酵36h后，L-山梨糖产量达到225g/L，与出发菌株节相比将发酵时间缩短了12h。本发明通过调控山梨醇脱氢途径，成功实现了山梨醇快速化地导向目标代谢产物山梨糖的目的。为今后利用代谢工程手段改造菌株促进目标产物过量积累提供了一定的借鉴意义。
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公开(公告)号：CN103805545A
公开(公告)日：2014-05-21
申请号：CN201410055749.6
申请日：2014-02-19
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种氧化葡萄糖酸杆菌无抗性标记基因敲除体系，属于基因工程技术领域。本发明通过同源重组技术，将G.oxydans中upp基因进行敲除，得到一upp基因缺陷型菌株；同时构建了含有一个能在G.oxydans中良好转录表达并具有条件致死功能的upp基因、一个用于G.oxydans转化子选择的抗性标记卡那霉素标记抗性基因及一个MCS多克隆位点的重组整合质粒。该质粒适用于G.oxydans染色体基因敲除和替代，相比使用抗性标记基因作为筛选标记进行基因敲除有以下两点优势：不将抗性基因引入G.oxydans基因组中，避免了抗性基因对上下游基因产生极性作用；利用该敲除体系可以在同一菌株中进行多次染色体基因敲除和替代。
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公开(公告)号：CN102586347B
公开(公告)日：2014-04-09
申请号：CN201210056106.4
申请日：2012-03-06
Applicant: 江南大学 , 宜兴协联生物化学有限公司
Abstract: 本发明公开了一种两阶段pH控制高产α-酮戊二酸的方法，属于发酵工程领域。本发明采用两阶段控制pH调控发酵过程，以解脂亚洛酵母(Yarrowia lipolytica)CCTCC NO.M207143为生产菌株，发酵前期以CaCO3为pH缓冲剂，后期用NaOH维持pH＝2.5，大量积累α-酮戊二酸，实验室规模α-酮戊二酸产量达到53.4g/L，比恒定pH＝2.5时，α-酮戊二酸产量提高了142.7％；比仅用CaCO3为pH缓冲剂，α-酮戊二酸产量提高了32.5％；发酵后期低pH值能降低染菌的概率，减少NaOH用量，利于下游产品的提取；具有广阔的工业应用前景。
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