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公开(公告)号：CN101367870A
公开(公告)日：2009-02-18
申请号：CN200810137277.3
申请日：2008-10-09
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 牛轮状病毒重组VP6蛋白抗原及其制备方法，它涉及一种牛轮状病毒重组蛋白抗原及其制备方法。它解决了目前对犊牛轮状病毒腹泻的诊断方法存在着费时、费力又不能快速诊断的弊端，以及过程繁琐、又需要昂贵的分子生物学试剂及相应的仪器设备的问题。牛轮状病毒重组VP6蛋白抗原由重组载体质粒转化的大肠杆菌表达。制备方法：一、VP6基因的PCR扩增；二、获得重组质粒；三、获得重组菌；四、重组VP6蛋白抗原的诱导表达；五、纯化。本发明为血清学方法诊断犊牛轮状病毒腹泻提供了诊断抗原，具有极强的特异性和准确性。使用本发明牛轮状病毒重组VP6蛋白抗原、采用荧光抗体试验和酶联免疫吸附等血清学试验具有诊断方法省时、省力、快速的优点，且不需要昂贵的试剂及设备。
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公开(公告)号：CN103555754B
公开(公告)日：2015-09-30
申请号：CN201310521441.1
申请日：2013-10-29
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了一种干酪乳杆菌菌影及其制备方法和应用，属于生物技术领域。本发明选择干酪乳杆菌作为研究对象，通过分离干酪乳杆菌的噬菌体，预测并克隆其裂解基因，将含有克隆得到的裂解基因的重组载体转化干酪乳杆菌，诱导裂解基因表达后制成菌影。本发明以干酪乳杆菌菌影作为抗原传递载体使用，做到了真正意义上的安全可靠。此外，干酪乳杆菌菌影可通过发酵大量生产，冻干后在室温下可保存较长时间，为进一步应用于生产实践降低了成本，也为进一步设计新型安全有效的药物，特别是疫苗的递送系统，从而应用于预防及治疗疾病提供了一种新的思路和方法。
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公开(公告)号：CN104593397A
公开(公告)日：2015-05-06
申请号：CN201510016549.4
申请日：2015-01-12
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N15/62 , C07K19/00 , C12N1/21 , A61K39/116 , A61K39/108 , A61K48/00 , A61P31/04 , A61P1/12 , C12R1/19 , C12R1/01
Abstract: 本发明公开了一种优化的产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)多价抗原基因序列及其在预防断奶仔猪腹泻中的应用，属于生物技术领域。本发明根据乳酸乳球菌密码子使用偏好，大片段合成了包含引起断奶仔猪腹泻的常见ETEC优势血清型的F4+的主要结构蛋白FaeG、F18+的受体结合域RBD和毒素Stx2e、STa突变体、LT B亚单位、STb 6种抗原基因以及分别靶向M细胞、肠道细胞的分子肽CO1、YadA31基因的多价抗原基因序列，各基因间由GGGGS连接而成。该基因不但可以用于构建乳酸菌活载体疫苗，显著提高目的蛋白的分泌表达量，具有良好的免疫原性和保护效应，而且也适用于在大肠杆菌中高效表达，实验证明，其包涵体具有良好免疫活性，可作为预防断奶仔猪F4+、F18+ETEC感染的疫苗。
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公开(公告)号：CN103555754A
公开(公告)日：2014-02-05
申请号：CN201310521441.1
申请日：2013-10-29
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了一种干酪乳杆菌菌影及其制备方法和应用，属于生物技术领域。本发明选择干酪乳杆菌作为研究对象，通过分离干酪乳杆菌的噬菌体，预测并克隆其裂解基因，将含有克隆得到的裂解基因的重组载体转化干酪乳杆菌，诱导裂解基因表达后制成菌影。本发明以干酪乳杆菌菌影作为抗原传递载体使用，做到了真正意义上的安全可靠。此外，干酪乳杆菌菌影可通过发酵大量生产，冻干后在室温下可保存较长时间，为进一步应用于生产实践降低了成本，也为进一步设计新型安全有效的药物，特别是疫苗的递送系统，从而应用于预防及治疗疾病提供了一种新的思路和方法。
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公开(公告)号：CN102816788A
公开(公告)日：2012-12-12
申请号：CN201210302585.3
申请日：2012-08-23
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 一种在乳酸乳球菌中表达鸡堆型艾美耳球虫3-1E蛋白的方法，涉及一种表达鸡堆型艾美耳球虫3-1E蛋白的方法。本发明是要解决目前乳酸乳球菌中无法表达鸡艾美耳球虫子孢子/裂殖子阶段表面抗原3-1E的问题。方法：将鸡堆型艾美耳球虫3-1E基因序列依照乳酸乳球菌的密码子偏好性进行优化，插入克隆载体并转化大肠杆菌感受态细胞，得阳性转化子；将阳性转化子和乳酸菌表达载体酶切后连接，构建重组表达载体；转化乳酸菌感受态细胞，鉴定；进行重组菌培养及诱导，即完成在乳酸乳球菌NZ9000中表达3-1E蛋白。本发明将密码子优化后的经人工合成的3-1E蛋白成功的在乳酸乳球菌中进行了表达。本发明方法用于球虫病的预防领域。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101833002A
公开(公告)日：2010-09-15
申请号：CN201010151344.4
申请日：2010-04-21
Applicant: 东北农业大学 , 中国动物卫生与流行病学中心
IPC: G01N33/569 , C12N15/44 , C12N15/866 , C12N7/01 , C07K14/11
Abstract: 本发明涉及一种鉴别免疫动物是否感染A型流感病毒的抗体间接免疫荧光试验方法。该方法是用昆虫杆状病毒表达A型流感病毒NA蛋白作为抗原，建立抗体间接免疫荧光试验方法，检测A型流感病毒NA蛋白血清抗体。表达的蛋白可直接作为抗原，不需要纯化。本发明建立的方法是A型流感病毒“标记”疫苗的配套检测方法，用于鉴别接种了A型流感“标记”疫苗的动物，如禽、猪等是否感染相应亚型流感病毒；作为一种筛选方法，该方法可用于临床血清样品检测，判定接种了A型流感“标记”疫苗的动物，如禽、猪等是否感染相应亚型流感病毒，以便尽早采取相应的防控措施，有利于根除和消灭临床上流行的相应A型流感病毒。
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公开(公告)号：CN101508969A
公开(公告)日：2009-08-19
申请号：CN200910071260.7
申请日：2009-01-14
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明提供的是一种表达传染性胰腺坏死病毒(Infectious pancreas necrosis virus，IPNV)VP2蛋白的重组干酪乳杆菌及制法。根据传染性胰腺坏死病毒VP2蛋白的全基因序列及表达载体质粒的基因融合特点，设计一对引物，进行PCR，获得含有IPNV VP2基因主要抗原位点的1095bp目的片段，将扩增得到的IPNV VP2基因与表面表达的载体质粒pPG1进行连接，通过电转化进入宿主菌干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393细胞内，含阳性重组质粒pPG1－IPNV VP2的干酪乳杆菌命名为pPG1－IPNV VP2/L.casei 393。将重组pPG1－IPNV VP2/L.casei 393在乳糖的诱导下进行表达。本发明中构建了传染性胰腺坏死病毒VP2蛋白干酪乳杆菌表达载体系统，表达了含有IPNV VP2蛋白主要抗原位点的约40KDa的目的蛋白，免疫印迹实验和间接免疫荧光试验均表明，所表达的外源蛋白能够与IPNV免疫血清发生反应，表明重组VP2蛋白与IPNV天然抗原一样具有相同的抗原性。
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公开(公告)号：CN101050450A
公开(公告)日：2007-10-10
申请号：CN200710071893.9
申请日：2007-03-16
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明提供的是一种β－葡萄糖苷酸酶在干酪乳杆菌表达系统中的诱导表达方法。以干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393为宿主菌，通过细胞表面表达载体pPG611.1以及细胞外分泌表达载体pPG612.1表达β－葡萄糖苷酸酶。本发明确定目的蛋白均在细胞内产生，细胞表面表达的目的蛋白结合在细胞壁上，而分泌表达的目的蛋白并未在上清中出现，实际上仍然结合在菌体上。本发明使用D－木糖作为诱导物诱导目的蛋白的表达；同时根据干酪乳杆菌的生长特性，从多方面探索了gusA的最佳诱导表达条件，该系统的高效表达为抗原传递奠定了基础。
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公开(公告)号：CN104774782B
公开(公告)日：2017-12-19
申请号：CN201410817717.5
申请日：2014-12-25
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了鸡源粪肠球菌分离株及其应用。本发明从20周龄健康鸡盲肠中分离得到一株性能优异的粪肠球菌分离株B10，其微生物保藏编号为：CCTCC No：M 2014488，分类命名为MDXEF‑1。该分离株有优异的耐酸性能和耐胆盐性能，抑菌谱广，对常见致病菌均有明显的抑制作用；分离株MDXEF‑1对多种抗生素敏感，将该菌饲喂给肉仔鸡后可以显著增加鸡的体重，促进鸡的生长，能够作为促进禽类生长的饲料添加剂。本发明分离株MDXEF‑1可以作为宿主菌而且在不外加nisin诱导物的情况下高效表达异源蛋白，适宜于生产中大规模发酵应用，能作为饲用乳酸菌疫苗运送载体。
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公开(公告)号：CN104774782A
公开(公告)日：2015-07-15
申请号：CN201410817717.5
申请日：2014-12-25
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了鸡源粪肠球菌分离株及其应用。本发明从20周龄健康鸡盲肠中分离得到一株性能优异的粪肠球菌分离株B10，其微生物保藏编号为：CCTCC No：M2014488，分类命名为MDXEF-1。该分离株有优异的耐酸性能和耐胆盐性能，抑菌谱广，对常见致病菌均有明显的抑制作用；分离株MDXEF-1对多种抗生素敏感，将该菌饲喂给肉仔鸡后可以显著增加鸡的体重，促进鸡的生长，能够作为促进禽类生长的饲料添加剂。本发明分离株MDXEF-1可以作为宿主菌而且在不外加nisin诱导物的情况下高效表达异源蛋白，适宜于生产中大规模发酵应用，能作为饲用乳酸菌疫苗运送载体。
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